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《非来不可》邀请孟非、刘震云、张颜齐和李雅娟（伢伢）作为常驻嘉宾，与此同时，每期节目还会有多位飞行嘉宾现身，大张伟、李雪琴、陈鸿宇、刘奕君、仁科、蒲煜星、秦昊、刘敏涛、伯远、张纯烨等数十位嘉宾将陆续和观众见面。这些嘉宾们根据年龄划分为“uncle组”与“young组”，各自带队负责一天的行程，体验完全与众不同的“uncle day”与“young day”，在差异化的旅行中寻找共鸣，在交流之间收获彼此的真实想法。观众们也将跟随他们走遍祖国的大江南北，在呼伦贝尔、大兴安岭感受大自然的魅力，设备保温施工探访驯鹿部落；在成都领略川剧、茶馆等传统文化；后期节目更将探访江苏、云南等以及新兴城市社区文化。
三次新疆综科学考察队队员 中国科学院新疆生态与地理研究所研究员 房保柱：前两次新疆科考，微生物资源这部分几乎是没有的。通过这次科考，了解整个盐湖底泥里的微生物群落结构，利用这种微生物抗逆促生的能力，把它做成生物菌肥，促进植物在盐碱地的生长。
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